骨细胞形成过程中成纤维细胞生长因子受体3的调节作用及机制

文题释义： 失神经骨折：机体骨折合并有各类、各层面神经的损伤。随着社会经济的飞速发展,这类骨折的发生也逐年增多,在愈合过程中表现出较单纯骨折愈合加速且骨痂过量生长,甚至在肌肉中出现异位骨化,尤其是关节周围的骨折,严重影响关节功能和治疗效果,已成为修复重建和组织工程领域的研究热点。 创伤性神经损伤：包括创伤性颅脑损伤、脊髓损伤和周围神经损伤。这类损伤伴有骨折的患者表现出较单纯骨折愈合加速且骨痂过量生长,甚至在肌肉中出现异位骨化。 背景：在临床治疗中,创伤性神经损伤伴有骨折的患者表现出较单纯骨折愈合加速且骨痂过量生长,甚至在肌肉中出现异位骨化,严重影响这类骨折的治疗效果。对于影响失神经后骨折愈合加速的具体原因和机制,目前并不清楚。 目的：探索成纤维细胞生长因子受体3抑制剂在骨折愈合过程中的作用及表达变化规律。 方法：实验方案经兰州大学第二医院动物实验伦理委员会批准。选用60只雌性SD大鼠,制作坐骨神经损伤的胫骨横行骨折模型,随机分为实验组及对照组2组。实验组造模后腹腔注射成纤维细胞生长因子受体3阻滞剂;对照组造模后给等剂量生理盐水。分别于造模后4,7,10,14,21 d拍X射线片后取胫骨大体标本(每个时间点6只),取胫骨进行苏木精-伊红染色、Masson三色法染色组织学观察;计算大鼠胫骨骨细胞密度和骨小梁密度;测定胫骨组织纤维率。 结果与结论：①两组大鼠胫骨X射线观察差别不显著;②苏木精-伊红染色、Masson三色法染色结果显示实验组修复效果比对照组较好;③2组大鼠胫骨骨细胞密度、骨小梁密度及胫骨组织纤维率在7-14 d有明显差别(实验组>对照组);④抑制成纤维细胞生长因子受体3在周围神经失神经情况下能够加快骨折愈合,促进骨痂的塑形。成纤维细胞生长因子受体3在骨折后7-14 d时间段表达最为活跃。 ORCID: 0000-0002-7687-4383(许少策) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

封闭负压引流干预慢性创面神经生长因子和微血管的变化

背景：随着老龄化程度的增加,慢性创面呈上升趋势,在治愈慢性创面方法匮乏的情况下,封闭负压引流技术开始应用于临床。目的：观察封闭负压引流技术对人慢性创面组织中神经生长因子表达及微血管数量的影响,探索促进慢性创面愈合的机制。方法：以10例慢性创面患者为观察对象,其中胸部软组织缺损、骨髓炎伴骨外露和截肢后残端大面积皮肤缺损各1例、皮肤撕脱伤后创面感染2例、胫骨骨髓炎2例、术后伤口感染3例。分别于封闭负压引流技术吸引前、吸引7 d和14 d切取创周皮肤和创面内肉芽组织,采用免疫组织化学技术检测神经生长因子表达和微血管数量变化,并观察伤口愈合情况。结果与结论：封闭负压引流技术治疗7 d和14 d后成纤维细胞及血管内皮细胞中的神经生长因子表达明显高于治疗前（P ＜0.001）。封闭负压引流治疗使微血管数量显著增加（P ＜0.05-0.01）。封闭负压引流治疗前创基内肉芽组织量少且较晦暗,存在坏死组织和较多脓性分泌物,伤口周围组织肿胀明显。经封闭负压引流治疗后,伤口内坏死组织和脓性分泌物逐渐减少,肉芽组织呈细颗粒状,鲜红色,触之易出血,伤口周围水肿消退。提示封闭负压引流技术可以提高慢性创面创周组织中神经生长因子表达和微血管数量,促进创面愈合。     

成年大鼠急性压迫性脊髓损伤模型音猬因子的表达

背景：在神经系统的发育中,音猬因子信号通路的主要作用为诱导整个中枢神经系统形成背腹两侧分区,当这一信号通路受到破坏时,将导致整个中枢神经系统腹侧表型神经元的完全丧失。目的：制造成年大鼠急性压迫性脊髓损伤模型,检测脊髓急性压迫性损伤后与发育相关的重要分子音猬因子的表达,探讨其在神经再生过程中所发挥的作用。方法：将30只同龄SD大鼠置入后路压迫装置,制作成急性压迫性脊髓损伤模型。随机分为椎板钻孔组5只和急性脊髓损伤组25只。应用原位杂交检测方法,分别于脊髓损伤后1,3,5,7,14 d对损伤区行音猬因子mRNA检测。结果与结论：脊髓损伤后7 d,音猬因子表达水平达到最大值,在损伤区至远端10 mm处的灰质和白质中都有表达。音猬因子在室管膜细胞的表达明显低于在灰质和白质中的表达;其在室管膜区域的表达仅限于损伤区域周围5 mm的范围内,分布范围明显小于在灰质和白质中的表达。提示激活急性压迫性脊髓损伤模型音猬因子的表达,可能和损伤脊髓神经的再生有关。     

封闭负压引流干预慢性创面神经生长因子和微血管的变化

背景：随着老龄化程度的增加,慢性创面呈上升趋势,在治愈慢性创面方法匮乏的情况下,封闭负压引流技术开始应用于临床。　目的：观察封闭负压引流技术对人慢性创面组织中神经生长因子表达及微血管数量的影响,探索促进慢性创面愈合的机制。方法：以10例慢性创面患者为观察对象,其中胸部软组织缺损、骨髓炎伴骨外露和截肢后残端大面积皮肤缺损各1例、皮肤撕脱伤后创面感染2例、胫骨骨髓炎2例、术后伤口感染3例。分别于封闭负压引流技术吸引前、吸引7 d和14 d切取创周皮肤和创面内肉芽组织,采用免疫组织化学技术检测神经生长因子表达和微血管数量变化,并观察伤口愈合情况。结果与结论：封闭负压引流技术治疗7 d和14 d后成纤维细胞及血管内皮细胞中的神经生长因子表达明显高于治疗前(P < 0.001)。封闭负压引流治疗使微血管数量显著增加(P < 0.05-0.01)。封闭负压引流治疗前创基内肉芽组织量少且较晦暗,存在坏死组织和较多脓性分泌物,伤口周围组织肿胀明显。经封闭负压引流治疗后,伤口内坏死组织和脓性分泌物逐渐减少,肉芽组织呈细颗粒状,鲜红色,触之易出血,伤口周围水肿消退。提示封闭负压引流技术可以提高慢性创面创周组织中神经生长因子表达和微血管数量,促进创面愈合。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

关节软骨脱细胞支架材料的制备

目的:探讨脱细胞关节软骨支架材料的制备方法,制备软骨理想的组织工程支架材料。方法:实验于2005-12/2006-08在兰州大学第二医院骨科研究所实验室完成。实验方法:利用冷冻干燥、化学去污剂等方法制备脱细胞的兔关节软骨。在无菌状态下取青紫蓝兔的新鲜兔关节软骨,剪成3.5mm×3.5mm,厚度0.2～2.0mm,在冷冻干燥器中冻干12h。在10g/L Triton X-100、Tris-HCl液内加入蛋白酶抑制剂-苯甲基黄酰氟,持续振荡48h后标本以双蒸馏水连续冲洗后置于DNase I酶和RNase A酶混合液中消化。置于10g/L Triton X-100、Tris-HCl液中洗脱。实验评估:①大体观察:肉眼观察脱细胞后关节软骨的外观形态。②组织学观察:将制备的脱细胞关节软骨行石蜡包埋切片,行苏木精-伊红染色、Massion三色染色并在光镜下观察。③扫描电镜观察:将制备的脱细胞关节软骨以戊二醛-锇酸双固定后,行扫描电镜观察。结果:①脱细胞后关节软骨外观形态:肉眼下可见正常关节软骨呈白色或淡黄色,脱细胞后关节软骨色呈灰白,半透明状,无光泽,外形与软骨相似并且仍维持了关节软骨的结构。②脱细胞后关节软骨的组织学变化:苏木精-伊红染色显示,软骨细胞消失,软骨巢分辨不清,在巢内没有蓝染的核物质,核细胞碎屑,只有红染为残留的细胞外基质。Massion三色染色显示,脱细胞后关节软骨内主要含有胶原纤维。③脱细胞后关节软骨的超微结构:扫描电镜下显示,脱细胞后关节软骨陷窝呈蜂窝状,未见到残余的细胞核、细胞器,残余的空穴高低不平。结论:经冷冻干燥、化学去污剂等方法可完整去除软骨中的细胞成分,保留胶原纤维等细胞外基质。     

完全脱钙松质骨的生物学特性*★

背景：脱钙松质骨被认为是一种“理想”的软骨组织工程支架材料已被广泛应用，但对其某些生物学特征目前仍不是十分清楚。 目的：体外观察脱钙骨基质的降解性能、孔隙率以及骨髓间充质干细胞和脱钙骨基质的黏附性。 设计、时间及地点：体外观察实验，分别于2005-01-08/04-15在兰州大学骨科研究所和2007-08-01/11-15在桂林医学院中心实验室进行。 材料：取青紫兰兔四肢骨干骺端及椎体松质骨，采用Urist提供的方法制作脱钙骨基质。 方法：将脱钙骨基质置于磷酸盐缓冲溶液中测定其降解率；用液体置换法测其孔隙率；用细胞计量法测定生长良好的浓度为1× 108 L-1的第3代骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质的黏附率。 主要观察指标：脱钙骨基质的降解率、孔隙率及骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质的黏附率。 结果：脱钙骨基质的降解随时间的延长逐渐加速，完全降解需要10~12周；所测孔隙率为(77.15±3.44)%；浓度为1×108 L-1的第3代骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质具有较高的黏附率(平均为71.25%)。 结论：脱钙骨基质的降解曲线和骨髓间充质干细胞的增殖曲线相一致，具备良好的孔隙率和黏附率，提示脱钙骨基质可能为软骨组织工程比较理想的生物支架材料。 关键词：脱钙骨基质；降解率；孔隙率；黏附率；骨髓间充质干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2009.47.011     

流体切应力对成骨细胞Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响

背景：力学刺激对Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路对成骨细胞的分化，增殖和凋亡有重要作用。Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响是近年来研究的热点。 目的：探讨流体切应力对Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响在促进骨细胞骨形成和修复中的作用。 方法：应用计算机检索CNKI 期刊全文数据库和PubMed数据库(1990-01/2009-12)与流体切应力对成骨细胞Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路影响有关的文章，纳入43篇符合标准的文献进行综述。 结果与结论：力学负荷刺激Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路可提高LRP5 G171V鼠骨细胞骨形成敏感性，导致骨量增多，密度增大。体内和体外力学实验都支持Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路是力学刺激的正常反应通路，Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路在力学刺激作用下能提高成骨或骨细胞的成骨敏感性。     

微丝聚合剂重构大鼠脊髓星形胶质细胞骨架对水通道蛋白4与K+通道蛋白4.1基因表达的影响

【摘要】 目的：探讨不同浓度微丝聚合剂（Jasplakinolide,JSK）对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白4（aquapor?鄄ins-4,AQP4）和K+通道蛋白4.1（potassium ion channel protein-4.1,Kir4.1）基因表达的影响。方法：分离培养原代大鼠脊髓星形胶质细胞并鉴定,采用浓度为0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml的JSK干预细胞2h。噻唑蓝比色法（3-4,5-Dimethylthiazol-2-yl-25-diphenyltetrazolium brom,MTT）检测细胞的增殖情况,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的变化和Real-time PCR法检测AQP4和Kir4.1 mRNA表达的变化。结果：0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml浓度的JSK在干预细胞2h时与空白对照组相比对细胞的增殖无明显差异（P＞0.05）,各浓度间相比无统计学意义。激光共聚焦显微镜观察0.05μg/ml、0.10μg/ml和0.20μg/ml 浓度的JSK可以使得微丝空间结构发生重构,而0.40μg/ml浓度则使细胞微丝发生破坏。Real-time PCR检测显示,0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml浓度的JSK均能显著降低AQP4和Kir4.1基因的表达,并与对照组相比有统计学意义（P＜0.05）,且0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml浓度间相比也有统计学意义。结论：0.05μg/ml、0.10μg/ml和0.20μg/ml浓度的JSK可使大鼠脊髓星形胶质细胞微丝发生重构且可以下调AQP4和Kir4.1基因的表达。     

USS钉棒系统内固定治疗胸腰椎骨折60例体会

目的 总结USS钉棒系统对骨折复位、椎体高度恢复以及神经功能恢复情况,寻求胸腰椎骨折的最佳治疗方法.方法 对60例不同类型的胸腰椎骨折,术后摄X线片观察椎体恢复程度,对手术前后的神经功能进行评估.结果 60例随访12～36个月,术后椎体高度全部恢复;椎体后移、旋转、脱位得到矫正;Cobb角恢复正常.神经功能Frankel分级法评估,除2例A级未恢复外,其余均恢复良好.结论 采用USS钉棒系统治疗胸腰椎骨折具有独特的优点,疗效满意.